Miguel Orlando Ochoa Rodríguez¹,  Renato Pérez  Soliz², Mirian Muñoz Sarmiento³.

¹Especialista de  primer  grado   en Fisiología Normal y Patológica. Profesor Instructor. Departamento de Ciencias Fisiológicas.
²Especialista de primer grado en M.G.I e Inmunología. Profesor Instructor. Departamento de Anatomía Patológica. Hospital  Lenin.
³Técnico de  laboratorio clínico. Departamento de investigaciones. Facultad de Ciencias Médicas “Mariana Grajales Coello”.

RESUMEN

Se realizó un estudio descriptivo transversal  desde septiembre de 1999 a marzo del 2000  en 25 recién nacidos sanos  en el Hospital Provincial Vladimir Ilich Lenin. Los pacientes se seleccionaron según  criterios de inclusión y exclusión con los objetivos de distribuir los valores absolutos y relativos del diferencial leucocitario, determinar los valores absolutos del test de roseta espontánea y comparar los resultados obtenidos con los valores normales del adulto. A cada neonato estudiado se le tomó  una muestra de sangre del cordón umbilical  para el montaje de la roseta espontánea  y el leucograma. Los valores obtenidos en el leucograma  fueron similares a los reportados  en la literatura; el valor del test de roseta espontánea fue de 2,29 x 10⁹  cel/ L ± 0,20,  estas cifras resultaron superiores a las del adulto sano. Se utilizó el test de media en el análisis estadístico. Los resultados se muestran en cuadros.

Palabras claves: Linfocitos T.  Roseta espontánea. Inmunidad celular. Neonatos sanos.

ABSTRACT

A descriptive ,  cross sectional study  was carried out from  September 1999 to March  2000 in 25 healthy newborn  babies born at Provincial  Hospital  Vladimir  Ilich  Lenin . The patients  were  recruited according  to the inclusion  and exclusion  criteria  aimed to distribute  the absolute  and relative  values of leukocytic differencial, to determine  the absolute values of  E rossette test  and to compare our results with those  obtained from health adults. The  blood samples to perform  E  rossette test and leukocyte count were taken from the umbilical cord. The  values obtained  in the leukocyte count were similar to those  found  in the  medical  literature. The  value of the  E  rossette test was  2.29 x 10⁹  cel/ L  ±  0.20. This  figure was higher than the value found in  healthy adults. The results are shown in charts.

Key words:  E rossette. Healthy newborns. T lymphocyte. Celular immunity.

INTRODUCCIÓN

EL  recién  nacido presenta características propias  en  su inmunidad  que  le permiten vivir como  huésped  dentro  del útero  materno, pero que motivan una mala capacidad para  la localización  de  las infecciones y una  deficiente  defensa general  contra  ellas y una  pobre neutralización viral. La inmadurez   de  los  mecanismos  de  la  resistencia   específica  gobernados  por las células T y B, explica el incremento  del número de infecciones en los primeros años de la vida ^1. Estas células son las protagonistas de los mecanismos inmunes específicos celulares y humorales ^2,3,4.  

La respuesta inmune celular dirigida por los linfocitos T que maduran en el timo juega un importante papel en los mecanismos defensivos del neonato^5,6,7. El paradigma de las células T cooperadoras (Th) complementa el equilibrio de este mecanismo defensivo entre la inmunidad humoral y la inmunidad celular guiado por las diferentes citoquinas en su diferenciación ^8,9,10.

Desde hace muchos años se realizan múltiples investigaciones sobre  el estudio de marcadores de membranas de las  células T ^11,12,13.. Una  de las propiedades que los distingue del resto  de  los linfocitos  es su fijación con hematíes de carnero  formando rosetas espontáneas^14,15. Este marcador ha  constituido un  buen indicador en la identificación de la estirpe   celular T y es un instrumento valioso en las investigaciones de  las enfermedades linfoproliferativas, en el diagnóstico de  las inmunodeficiencias y en el pronóstico y  tratamiento de otras enfermedades inmunológicas ^16,17.

Los resultados que se reportan en la literatura respecto al  test de  roseta espontánea son muy diversos existiendo  grandes variaciones  entre los resultados de los autores, aunque mantienen los principios generales de la técnica. Lo  anterior nos motiva y nos muestra la necesidad de llevar a cabo el  montaje de este procedimiento en nuestro laboratorio  de acuerdo a nuestras  condiciones con los objetivos de distribuir los valores absolutos y relativos  del diferencial leucocitario, determinar los valores absolutos del test de roseta espontánea  en recién nacidos sanos y comparar los resultados obtenidos con los valores normales del adulto sano registrados en nuestro laboratorio y así contribuir al conocimiento del comportamiento de los marcadores linfoides T en  sangre periférica en recién nacidos sanos.

MÉTODO

Se  realizó un estudio descriptivo transversal en el  período comprendido de; septiembre 1999 - marzo del 2000, en el laboratorio  de inmunología de la Facultad de Ciencias Médicas de la  provincia Holguín.  Se seleccionó una muestra de sangre de  25  recién nacidos  sanos  en el Hospital Docente Vladimir  Ilich  Lenin, teniendo en cuenta los criterios de selección ¹².   

Los criterios de inclusión fueron: recién nacidos a término  (37-42 semanas), parto eutócico, peso  (2500-3500 gs), puntaje de Apgar mayor de 7, madre que no haya padecido de procesos infecciosos o enfermedades no infecciosas crónicas durante el embarazo.    Los criterios de exclusión fueron: presencia de malformaciones congénitas, infecciones intrauterinas y neonatales, íctero por conflicto RH ó ABO, traumatismos obstétricos, membrana hialina pulmonar, crecimiento intrauterino retardado, asfixia, anoxia o hipoxia  y la inmadurez por causas  idiopáticas   y secundarias.

A cada neonato seleccionado se le tomó una muestra de 3 ml de sangre del cordón umbilical  y se depositó en un tubo con heparina para la realización  del leucograma y el montaje del test de roseta espontánea.

Para  la realización del test de roseta espontánea se  llevaron a cabo los siguientes pasos generales: aislamiento y ajuste de los linfocitos;  preparación y ajuste de una suspensión  de hematíes de carnero;  mezcla e incubación de ambas suspensiones; montaje en portaobjeto, tinción con hematoxilina y eosina y lectura en un microscopio óptico para determinar el por ciento de células formadoras de roseta espontánea (CFR) en 200 células.

El número absoluto de células formadoras de rosetas se obtuvo a partir del recuento total y diferencial de leucocitos mediante la siguiente fórmula.

El  Conteo linfocitario  es igual al  número total de leucocitos por el por ciento  de linfocitos  dividido entre 100.

El número total  de células formadoras de rosetas (CFR) se calcula a partir del número      absoluto de linfocitos por  el por ciento de CFR dividido entre 100.                                        

Los resultados obtenidos se almacenaron en una base de datos y luego se realizó el procesamiento estadístico mediante el test de comparación de media por el paquete estadístico Microsta.  Los resultados se mostraron  en cuadros.

RESULTADOS

El recuento total de leucocitos fue de 12,5 x 10⁹ cel / L y el número absoluto de linfocitos fue de 3,75 x 10⁹ cel / L para un 30,0 % (cuadro 1).

Las cifras que se obtuvieron al realizar el test de  roseta espontánea fueron de 2,29 x 10 cel / L  ± 0.20 para un 69, 20 %.

Cuadro 1.  Distribución de los valores absolutos y porcentuales de los leucocitos en sangre  periférica. N= 25.

Fuentes:  Datos  del autor.

Cuadro 2. Valores  obtenidos  mediante el test de roseta espontánea  en el recién nacido y el adulto.

Fuente: Datos del autor.

DISCUSIÓN

El número total de leucocitos  y el  por ciento  de linfocitos obtenidos se encuentran en el rango de  concentración planteado  por otros autores. Xanthou  plantea  que  la  variación  del número  total de leucocitos oscila entre 10,0 - 26,0 x 10⁹ cel / L  y  señala  la  reducción  de  la  cantidad  total  hasta   6,0 - 15,0 x 10⁹  cel / L durante la primera semana de edad del neonato, lo que está en relación con la eliminación de células mieloides inmaduras⁴. Además este autor   reporta el número  absoluto de linfocitos  entre  3,5 – 8,5 x 10⁹  cel / L lo que  coincide con los resultados obtenidos en nuestro laboratorio.

Guyton  y Hall plantean que inmediatamente después de nacer  el recuento de leucocitos del neonato es de unos 45 000 / microlitros, cifra que es unas cinco veces mayor  que las del adulto  normal. Estas diferencias en el rango de concentración pueden deberse en parte a la inmadurez o escaso desarrollo de los distintos sistemas del cuerpo y también a que los sistemas de regulación  simplemente no se han ajustado todavía a la nueva forma de vida¹⁸.

El  número total de leucocitos  y el  por ciento de linfocitos que nos brinda el leucograma  son de interés en la interpretación  del test de roseta espontánea, pues nos permite determinar el número absoluto  de los linfocitos T  lo que es muy importante pues constituye  una medida precisa  para conocer la cantidad  de linfocitos  de que dispone  el individuo  en un momento determinado.

La mayor parte de los trabajos realizados por otros autores reportan los valores del test de roseta espontánea  en valores porcentuales. Nosotros además, calculamos  los valores absolutos por considerarlos un valor más fiel  de  la cantidad de células T  ya  que constituye una medida  más discriminativa  de dispersión de las cifras individuales. En algunos casos el por ciento de  células formadora de roseta espontánea  fue inferior o superior  a los valores medios, sin embargo al calcular los valores  se obtuvieron cifras en el rango de normalidad.

Al comparar los valores normales del test de roseta espontánea  en el recién nacido  con los valores de referencia del adulto  de nuestro laboratorio (1,93 x 10⁹ cel/ L   para un 68,72 %),  se evidenciaron  diferencias significativas, siendo el número absoluto de este marcador en el recién nacido superior al del adulto¹³ (Cuadro # 2).  Estos resultados coinciden con los obtenidos por Robertson Parkman, lo que puede explicarse por la presencia  en la sangre periférica de células linfoides inmaduras.

CONCLUSIONES

Los valores encontrados en el   leucograma     están el  rango  de  concentración reportados en la literatura.

Las cifras obtenidas mediante el test de roseta espontánea fueron de 2,29 x  10⁹ cel / L   ±  0,20.

En el recién nacido sano  se  constataron  cifras superiores  a las determinadas en el adulto mediante el test de roseta espontánea.

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Correspondencia: Dr. Miguel Ochoa Rodríguez. Dpto. de Ciencias Fisiolñógicas. FCM Holguín. E_mail: fisiol@cristal.hlg.sld.cu

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