Trabajo original
Departamento de control de investigaciones biológicas. Planta de insulina. Consejo de estado.
Estudio toxicológico preclínico de la Melaleuca leucodendron Lin.
Preliminary Toxologic Study of Melalenea Leuchodendrora.
Dr. Manuel González
Morales1, Lic. Gaston García Simón2, Lic. Aliusca Piloto
Alfonso3, Dra. Dania Oropeza1,
Técn. Arturo Valdivieso
Garcia4.
1. Especialista de 1er Grado en Farmacología Clínica, Facultad de Ciencias Médicas de Holguín.
2. Especialista A en Control Biológico. Jefe Dpto. Control Biológico Laboratorio Liorab.
3. Especialista B en Control Biológico. Dpto. Control Biológico Laboratorio Liorab.
4. Técnico en Control Biológico. Dpto. Control Biológico Laboratorio Liorab.
RESUMEN.
En el presente trabajo se realizan los estudios de toxicidad aguda dérmica(TAD)
de un extracto hidroalcohólico de Melaleuca leucodendron L.(Cayeput), así como ensayos de irritabilidad oftálmica, dérmica y de sensibilización a las cremas elaboradas a base de este extracto(Melacreen al 2% y con sodio dodecyl sulfato)
Las técnicas utilizadas fueron las que aparecen en las guías de la OCDE(Organización para la cooperación y desarrollo económico) así como de la ISO(International standaritation organization).
Los resultados obtenidos indican que la toxicidad aguda dérmica a la dosis ensayada de 2000mg/kg. no se produjo toxicidad observable en los animales estudiados.
Los ensayos de irritabilidad oftálmica indicaron que la crema al 2% era irritante de estructuras oculares, no así la que contenía sodio dodecyl sulfato, sin embargo las pruebas de irritabilidad dérmica y de sensibilización indican que las mismas son prácticamente no tóxicas.
Palabras claves: Toxicidad, animales de Experimentación
SUMMARY
This research paper comprises studies on acute dermic toxicity of hydroalcoholic extract of Melaleuca leucodendron L(Cayeput) on well as some tests on ophtalmic and dermic sensitivity of creams manofactured in our center using such extract (comercially known on melacream 20%) and sodium dodecylsulfate techniques used in this kind of experimente involved those stated in the guidlines by the organization of cooperation and economic development and the international standarization organization.
Results showed no acute dermic toxicity on targected animals using a 2000 mg/kg dosis.
Ophtalmic irritant tests revealed that thecream 20% waspositive on ocular structures unlike the dodecyl sodiumsulfate. However both tests (dermic sensitivy and sensitization)showed no toxicity.
Key words: Toxicity experiment animals.
INTRODUCCIÓN
La especie Melaleuca leucodendron Lin. (Cayetup) es un árbol que fue familia de las Mirtáceas originario de Australia, introducida en nuestro país con fines ornamentales y de producir sombras.
Esta planta tiene importancia económica por tener en la composición química de sus hojas y ramas a los aceites esenciales cuyo principal componente es el 1-8 Cineol. (Aceite de Cayeput).
Las propiedades del aceite le permiten ser útil como antiséptico, expectorante, analgésico, antihistaminico, antiparasitario dérmico y antimicrobiano (1).
En nuestro país las investigaciones de plantas con posibles propiedades medicinales han alcanzado un gran desarrollo, pero este debe ir aparejado a los estudios toxicólogos que demuestren su baja toxicidad para el posible uso de estas en los seres humanos(2,3,4).
El presente trabajo va encaminado a efectuar los estudios de toxicidad aguda dérmica del principio activo de esta planta, así como efectuar los ensayos de irritabilidad oftálmica, dérmica y de sensibilización de una forma farmacéutica elaborada a partir del mismo.
MATERIAL Y METODO
Para cumplir con nuestros objetivos se realizaron los siguientes experimentos:
1-Toxicidad aguda dérmica(TAD)
2-Irritabilidad oftálmica.
3-Irritabilidad dérmica.
4-sensibilización.
Experimento #1
Ensayo de toxicidad aguda dérmica(Dosis limite)
En esta experiencia se utilizó como animal de experimentación a la rata albina wistar cuyo peso estaba comprendido en el rango siguiente: valor medio +-20% de éste
El día antes de loa prueba se rasuró el 10% de la superficie corporal, en la región dorsal a ambos lados de la columna vertebral, Se emplearon 10 hembras y 10 machos de los que se hicieron 4 grupos (por grupo), dos de ellos con tratamiento(extracto hidroalcohólico de cayeput) y dos con el vehículo(alcohol al 80%).
Las condiciones de alojamiento, alimentación, suministro de agua fueron las adecuadas para la especie. En el estudio se empleo solo un nivel de dosis(2000mg/kg.), el cual se aplicó en el dorso rasurado del animal, en una gas y sujeto a la piel mediante esparadrapo hipoalergénico durante 24 horas, transcurridas las cuales se retira el parche se lava la zona con abundante agua estéril, realizando después las observaciones pertinentes.
Exámenes clínicos:
El primero de los 14 días siguientes se realizó las observaciones correspondientes a posibles manifestaciones clínicas.
Todos los animales fueron chequeados para la aparición de eritemas o edemas en las zonas tratadas tanto con el Cayeput como con el vehículo.
El peso corporal (en gramos) se registró a los: 0, 7 y 14 días. La necropsia se realizó a todos los animales examinándose los órganos de la anatomía se tomaron muestras de: Hígado, Pulmón, y Riñón así como de la piel tratada para su procesamiento histopatológico.
CALCULOS
Los datos del peso corporal se procesaron estadísticamente empleando un análisis de varianza y la prueba de los rangos múltiples de Ducan(p=0.05)(5).
Las reacciones eritematosas y edematosas se evaluaron según tabla de Draize(6) obteniéndose el índice de irritación.
Experimento #2
Ensayo de irritabilidad oftálmica.
En este ensayo al igual que el de irritabilidad dérmica y el de sensibilización se emplearon dos formulaciones de cremas de Cayeput una al 2% y la otra que contenía sodio dodecyl sulfato.
Se utilizaron conejos albinos de la línea F1,procedentes del CENPALAB con un peso corporal de 2 ó más kg.las condiciones de alojamiento,alimentación y suministro de agua estuvieron de acuerdo con la especie.
Para analizar la crema de la Melaleuca al 2 y con SDS se utilizaron 3 conejos a los que se le aplicó 0.1g en el ojo derecho previamente revisado para evitar falsos positivos.
Las lecturas se realizaron a la hora, 24,48 y 72 horas después de la aplicación única del producto en estudio utilizando la tabla de Draize.
Se utilizó fluoresceína sódica para visualizar mejor los daños cornéales.
CALCULOS
Se calculó el índice de irritación Ocular(II0).
Para la clasificación de los resultados se utilizó la tabla de García y col(7).
Experimento # 3
Ensayo de irritabilidad dérmica
En este ensayo también se emplearon conejos con características similares en cuanto el peso y condiciones requeridas para la especie que en el precedente.
24 antes del inicio de la prueba se rasuraron los animales.El día de la prueba se aplicó 0.5g de las cremas en estudio en 3 sitios de la piel normal(para cada lote),se mantuvieron en contacto con la piel por medio de una gasa y un esparadrapo hipoalergénico.
4 horas después de la aplicación de las cremas se retiran los parches lavándose la zona de aplicación.
Las lecturas de los sitios tratados se efectuaron a la hora,24;48; y 72 horas de retirado el parche,siguiendo lo descrito por Draiza y col (6).
CALCULOS
Con los valores obtenidos para eritema y edema para cada sitio se determinó el índice de irritación dérmica primario(IIP) y se hizo la clasificación de acuerdo a la tabla que aparece en la norma ISO (8).
Experimento # 4
Prueba de sensibilización.
En este ensayo se emplearon curieles albinos de peso no menor de 300g con las condiciones de alojamiento,alimentación y agua de acuerdo a las condiciones de la especie, y procedían igual que los conejos de CENPALAB y como en los caso anteriores presentaban sus certificados de salud.
Se confeccionaron para cada crema estudiada dos grupos de 15 curieles cada uno del mismo sexo (Total 4 grupos).
A uno de los grupos se le aplicó la crema y al otro el vehículo.
El ensayo contó de 3 fases:-Inducción tópica
Descanso
Desafío
Se depilaron los curieles en la región interescapular y se inyectó 0.1ml de adyuvante completo de Freud,las aplicaciones en la fase inductiva se hicieron a los tiempos 0,2;4;7;9;11 y 14 días.
El período de descanso fue de 11 días ,transcurridos los cuales se comenzó con la fase de desafío aplicando 0.5 g de las cremas,en los grupos que correspondían,en los flancos de los curieles por 24 horas,de manera similar como se procede en el ensayo de irritabilidad dérmica.
Transcurridas 24 horas de la aplicación se retiran los parches y se comienza a realizar las observaciones correspondientes empleando igualmente la escala de Draize(6).
CALCULOS
Se calcula el % de animales sensibilizados y se compara con la tabla que aparece en la norma ISO para este tipo de prueba.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
Experiencia # 1
Los animales tratados con el extracto de Melaleuca así como a los que se le aplicó el vehículo solo durante el primer día presentaron somnolencia lo que pude ser atribuido al vehículo empleado (alcohol al 80%).
Con relación al peso de los animales al procesar estadísticamente los resultados ,en el caso de las hembras solo hubo diferencias entre el día 0 y 14 para el grupo tratado,no así para el vehículo,que aunque hay tendencia al aumento de peso la misma no llega a expresarse significativamente.
Para los machos no se presento en ninguno de los grupos ,ni días,diferencias significativas aunque si un aumento de peso en todos los casos.
La necropsia no mostró daños en órganos internos y las muestras de hígado,pulmón y riñón así como de piel no evidencian lesiones morfológicas ni histológicas que pongan de manifiesto efectos tóxicos provocados por el producto.
En las dosis utilizadas de 2000mg/kg. no se encontró muerte ni signos tóxicos de interés,en la literatura se plantea que si no se observa mortalidad a este nivel,no es necesario aumentar la dosis(5).
ENSAYO DE IRRITABILIDAD OFTALMICA
En la tabla 1 se muestran los resultados del ensayo de irritabilidad oftálmica,como se puede apreciar el lote de Melaleuca al 2% resultó rechazado pues su evaluación fue de 28.75 para el índice de irritación ocular lo que la cataloga como moderadamente irritante (7) es decir no pasa la prueba.
El hecho de que la crema al 2% no resultara aprobado no significa que no pude ser utilizada en clínica,en este caso seria conveniente hacer una especificación con respecto a este resultado.
Tabla 1. Evaluación de la irritabilidad oftálmica de la crema Cayeput.
| PRODUCTO | EVALUACION | IIO | CLASIFICACION |
| Melacreen al 2 % | 345 | 28.7 | Moderadamente irritante |
| Melacreen con SDS | 117 | 9.7 | No irritante |
IIO: Indice de irritación ocular.
SDS: Sodio dodecyl sulfato.
PRUEBA DE IRRITABILIDAD DERMICA
En la tabla 2 se encuentran los resultados de la evaluación de la irritabilidad dérmica,como se pude notar los lotes pasan el ensayo dado el índice de irritación primario que en ningún caso fue superior a 2 (8), por lo que se acepta su uso en afecciones de la piel.
Tabla 2. Resultados del ensayo de irritabilidad dérmica a la crema Cayeput 2 %.
| PRODUCTO | EVALUACION | IIP | CLASIFICACION |
| Melacreen al 2 % | 2 | 0.11 | No irritante |
| Melacreen con SDS | 3 | 0.16 | No irritante |
IIP: Indice de irritación primario.
SDS: Sodio dodecyl sulfato.
ENSAYO DE SENSIBILIZACION
En la evaluación de los resultados en la fase de desafío para el ensayo de sensibilización,ninguno de los animales de los 4 grupos presentó reacciones de eritema o edema, por lo que la evaluación fue de 0 para el o% de animales sensibilizados ,pasando satisfactoriamente el ensayo (9).
CONCLUSIONES
El extracto hidroalcohólico de Melaleuca leucodendron a la dosis de 2g/kg. pasa satisfactoriamente el ensayo de toxicidad aguda dérmica por lo que se considera poco tóxico para los humanos,
La crema de Melaleuca leucodendron al 2 % y con SDS resultaron aprobadas por el ensayo de irritabilidad dérmica.
La crema de Melaleuca leucodendrun al " % no paso el ensayo de irritabilidad oftálmica,a diferencia de la que contiene sodio dodecyl sulfato,que resulto aprobada.
No hubo ningún animal sensibilizado,por lo que se concluye que la crema de Melaleuca leucodendron no es un agente potencialmente sensibilizante.
BIBLIOGRAFIA
Roig y Mesa Juan Tomas. Diccionario Botánico de nombres vulgares cubanos. Editorial Científico-Técnica,La Habana-1988.
Guía metodológica para la investigación en plantas medicinales. Dirección de Ciencia y Técnica,Area de docencia e Investigaciones.MINSAP 1997.
OMS.Promoción y desarrollo de la medicina tradicional.Serie de informes técnicos # 622,Ginebra,1978 p 31.
OMS.87ª Reunión de medicina Tradicional y asistencia sanitaria moderna.1990.
Ping Knong (Peter) and Hayes Wallace A. Principles and methods for acute toxicity and eye irritancy chapter 6, p p 169..Ed raven Press,New York 1989.
Draize J.H.,Woodward G,and Calvency H.O. J,Pharmacol Exp-ther.82,377-1944.
Garcia G. , Palacios M y Pérez P.L. Rev. Cubana de Farm 22(2),5,1988.
ISO.Biological Evaluation of Medical Devices Part 10. 10993,1992.
OECD Guideline for testing of chemicals adopted by the council the 17 july 1992 #406.
Manuel González Morales. Departamento de Farmacología Clínica. Facultad de ciencias Médicas de Holguín. Ave. Lenin # 4. Holguín. 80100. Cuba.